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革蘭陽性菌裂解緩沖液用途
點擊次數(shù):1611 更新時間:2017-12-20

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中文名:革蘭陽性菌裂解緩沖液

供應(yīng)商:上海遠慕

規(guī)格:100ml

分類:核酸提取

保存:室溫,12個月

用途:裂解細菌(革蘭陽性菌)中提取RNA

組成:主要由Tris-HCl、EDTA、SDS、氯化鈉等組成,臨用前加入蛋白酶K。

適用范圍:限于科研實驗,不作臨床。

革蘭陽性菌裂解緩沖液用途

革蘭陽性菌裂解緩沖液說明

分離純化完整的RNA對于分子生物學(xué)的下游實驗極其重要,也是進行基因表達分析的基礎(chǔ)。從革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌中提取RNA的方法需要蛋白酶消化和有機溶劑抽提去除蛋白質(zhì),核酸消化去除DNA。革蘭陽性菌裂解緩沖液主要由Tris-HCl、氯化鈉、SDS等組成,臨用前加入蛋白酶K至終濃度100μg/ml。

 

革蘭陽性菌裂解緩沖液操作步驟:  

1、 取適量的革蘭陽性菌裂解緩沖液,加入蛋白酶K,待用。

2、 取10ml培養(yǎng)物,離心,棄上清。

 3、 重懸菌體于含有蛋白酶K的革蘭陽性菌裂解緩沖液,在干冰或其他低溫中凍結(jié)。

4、 解凍并超聲30W 3次,溫育。

5、 進行酚氯FANG異戊醇等方法抽提。 

 

革蘭陽性菌裂解緩沖液用途

1.裂解都用到緩沖劑,只要在緩沖溶液pH范圍內(nèi),BPS、Tris都可以作為緩沖劑,氯化鈉的濃度直接影響到蛋白與蛋白之間的相互作用,一般濃度在0-1M之間。一般而言,氯化鈉濃度越高,越不利于蛋白之間結(jié)合。EDTA濃度一般在0-5mM,也是緩沖劑的主要成分,也是酶活性抑止劑,量大可使酶失活保護蛋白。表面活性劑是非常值得關(guān)注的,離子性表面活性劑的裂解效果zui強,兩性非離子性表面活性劑裂解效果次之。一般離子性表面活性劑的用量在0.01%-0.05%之間,兩性表面活性劑用量在0-10mM之間,非離子性表面活性劑用量在0.1%-0.2%之間。在裂解液中常用到表面活性劑有Tritonx-100、NP-40、脫氧膽酸鈉、肌氨酸鈉、SDS、CTAB等。

2.裂解液中還有一個很重要的成分——蛋白酶抑止劑,其作用是阻止蛋白酶對細胞組織的消化作用,使組織細胞受到*的保護。不同的蛋白酶需要不同的抑止劑,對其選擇相當(dāng)重要,只有正確選擇,才能有效抑止蛋白的降解,使其維持原有的蛋白相互作用。

 

 

革蘭陽性菌裂解緩沖液注意事項:  

1.如果每次的使用量很小,可以適當(dāng)分裝后再使用;

2.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作;

3.對于使用后的廢棄物,不要或舊的試劑,應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理;

4.做好預(yù)防顛倒,摔壞的措施和管理體制;

?5.請遵循產(chǎn)品說明書進行嚴格操作。

 

標(biāo)簽:,革蘭陽性菌裂解緩沖液

 

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