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96TELISA試劑盒使用說明書本 在線
點擊次數(shù):1669 更新時間:2014-09-04

96ISA試劑盒使用說明書本

ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人成骨生長肽(OGP)水 平。用純化的人成骨生長肽(OGP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入成 骨生長肽(OGP),再與HRP標記的成骨生長肽(OGP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng) 過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。 顏色的深淺和樣品中的成骨生長肽(OGP)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值), 通過標準曲線計算樣品中人成骨生長肽(OGP)濃度。


【ELISA試劑盒操作步驟】

1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100 μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別 加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中 先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別 加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔 分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl, 濃度分別為1800ng/L,1200ng/L ,600ng/L,300ng/L, 150ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。 在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍 )。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次 ,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘 。
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. ELISA試劑盒測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加 終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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