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一些細胞爬片小知識了解一下
點擊次數(shù):785 更新時間:2023-05-18

什么叫細胞爬片?
細胞爬片就是讓玻片浸在細胞培養(yǎng)基內(nèi),細胞在玻片上生長,主要用于組織學(xué),免疫組織化xue,冰凍切片,細胞涂片,原位雜交等.

細胞爬片經(jīng)驗總結(jié):
1.爬片可用一般的蓋玻片,也可用爬片;
2.應(yīng)用蓋玻片,可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于 6 孔板、12 孔板或 24 孔板;裁剪時可用前護士輸液用于打開玻璃安瓶的小沙輪,或者是口腔科的那種小沙輪,輕輕劃一下后,稍用力一掰就分開了。 如果接種大皿的話,我一般不將蓋玻片切開,直接清潔后放入培養(yǎng)皿中,到染色時再將之切 開,這樣既保證了細胞均一性,又可同時做幾個指標(biāo)的染色。
3.將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過夜,第二天先用自來水沖洗 20 遍,再置于無 水酒清中浸泡 6 小時,再用三蒸水沖洗 3 遍(主要目的是將酸沖洗干凈就可以了,如果不干凈的話,細胞帖壁不好),放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進行高壓消毒。
4.高壓后取出放入烤箱中烤干,備用??靖珊罂煞湃氤瑑襞_中。
5.關(guān)于多聚賴氨酸,很多人都將玻片用此處理,以使細胞與玻片結(jié)合更牢。但我在做爬片時從來沒用過多聚賴氨酸,細胞貼壁仍然很好,且在做后續(xù)的免疫細胞化學(xué)染色、TUNEL 等凋亡檢測、免疫熒光等也從未脫過片。

細胞爬片:
1.yi酶消化細胞后計數(shù)重懸細胞于wan全培養(yǎng)基中。
2.加細胞時,根據(jù)玻片的大小,先在每個孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基,目的是使 玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,然后放玻片,防止加細胞懸液時玻片漂起,造成雙層細胞貼片。整個過程注意無菌操作。
3.根據(jù)自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可 4.待細胞貼壁后,可去上清加含藥培養(yǎng)基。
5.按照實驗設(shè)計,作用一定時間后取玻片。取玻片時由于玻片與培養(yǎng)皿底結(jié)合較緊,張力較大,我一般將注射器針頭針尖向背面弄個小鉤,這樣將爬片輕輕勾起,用小鑷子取出 就可以了。如果要做諸如 24h,48h,72h等這樣時間點的實驗的話,將所需數(shù)量的爬片取出時應(yīng)用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子。末取出的可接著繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞爬片的固定:
細胞爬片取出后,一般用PBS洗2遍,然后再做固定。當(dāng)然,根據(jù)研究目的,PBS洗也不是 一定要做的,比如做凋亡的TUNEL染色時就避免洗,因為凋亡的細胞在洗的過程中有可能會 脫落。 另外在保存細胞爬片的時候,我一般用培養(yǎng)皿或板,先在皿底放一層面巾紙,然后再放爬 片,這樣方便做實驗時取片。然后蓋上蓋子,并在蓋子上做標(biāo)記,為避免混淆,可用透明膠 帶將蓋子和皿連在一起。一般-20℃保存 2-3 個月的片子做免疫組化是沒有問題的。

以下為常用的固定液
1.冷丙酮 可用于一般的免疫組化染色。 將純的丙酮預(yù)先放入冰箱-20℃后便為冷丙酮(放心,丙酮在此溫度不會為固體的)細胞爬 片取出后,PBS洗 2 遍,便可加入冷丙酮于-20℃(丙酮有很強的揮發(fā)性,注意將含有丙酮 和爬片的器皿蓋嚴(yán),防止其揮發(fā))固定 10 分鐘。取出后,室溫吹干,然后放入-20℃保存。

2.多聚甲醛(常用4%):可用于免疫電鏡;也可用于免疫熒光以及TUNEL染色。 主要檢測組織內(nèi)一些性能嬌弱的抗原特別是細胞表面抗原,例如各類淋巴細胸分化決定簇 (CD)、主要組織相容性抗原等 室溫固定 15 分鐘后,將表面液體吹干,入-20℃保存。
3.95%乙醇,可用于免疫組化。
優(yōu)點:穿透性強、抗原性保存較好。 缺點:但醇類對低分子蛋白質(zhì)、多肽及胞漿內(nèi)蛋白質(zhì)保存效果較差,使蛋白變性的作用輕, 固定后可再溶解;染色過程中,溫育時間長,抗原可流失而減弱反應(yīng)強度 室溫固定 15 分鐘后,將表面液體吹干,入-20℃保存

4.甲醛(福爾馬林)應(yīng)用zui廣 優(yōu)點:形態(tài)結(jié)構(gòu)保存好,且穿透性強, 缺點: 甲醛放置過久可氧化為甲酸,使溶液pH降低,影響染色; 分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格 結(jié)構(gòu)可能部分或wan全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露??稍斐杉訇幮缘娜旧Y(jié)果。 室溫固定 15 分鐘后,將表面液體吹干,入-20℃保存 。

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