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【核酸提取】RNA提取與DNA的提取簡(jiǎn)介
點(diǎn)擊次數(shù):771 更新時(shí)間:2023-05-23

核酸分為兩大類:一類為核糖核酸(RNA),另一類為脫氧核糖核酸(DNA)。

核酸的分子量極大,從數(shù)萬(wàn)到億萬(wàn)。核酸是兩性化合物,在一定的等電點(diǎn)溶于水,其水溶液呈酸性,不溶于乙醇等有機(jī)溶劑。細(xì)胞內(nèi)的核酸常和蛋白質(zhì)結(jié)合成核蛋白。核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白在不同濃度的電解質(zhì)溶液中 的溶解度有顯著區(qū)別,在一定濃度范圍的氯化鈉溶液中,脫氧核糖核蛋白的溶解度隨著氯化鈉濃度的增加而逐漸下降,當(dāng)氯化鈉濃度為0.14mol/L時(shí),其溶解度僅為水中溶解度的1/100,但當(dāng)氯化鈉濃度在增加時(shí),脫氧核糖核蛋白的溶解度重新增加,氯化鈉濃度增加到0.5mol/L時(shí),其溶解度與水中溶解度相似,當(dāng)氯化鈉濃度增加到1mol/L時(shí),它的溶解度比在水中大2倍。核糖核蛋白在0.14mol/L氯化鈉溶液中仍有相當(dāng)大的溶解度,因此常用0.14mol/L氯化鈉溶液提取核糖核蛋白。而提取脫氧核糖核蛋白時(shí),則用1mol/L氯化鈉溶液。兩種核糖核蛋白的溶解度與溶液的pH也有關(guān),當(dāng)pH值為4.2時(shí),脫氧糖核蛋白的溶解度zui低,而pH值為2.0~2.5時(shí),核糖核蛋白的溶解度z最di。所以調(diào)節(jié)氯化鈉溶液的濃度和pH值,可使核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白分離開來(lái)。

RNA的提取

RNA的提取,通常是用0.14mol/L氯化鈉溶液將組織做均漿并反復(fù)提取細(xì)胞質(zhì)中的核糖核蛋白,而留下含有DNA的細(xì)胞核物質(zhì),然后用10%醋酸調(diào)至pH值為4.2時(shí),產(chǎn)生沉淀,離心,棄去上清液,先用0.5mol/L氯化鈉溶液,后用水洗滌沉淀,將核糖核蛋白溶解于0.5mol/L碳酸jing鈉溶液中,離心在取上清液,調(diào)節(jié)pH值為4.2的沉淀,沉淀用0.5mol/L氯化鈉溶液洗滌,再一次除去脫氧核糖核蛋白。核糖核蛋白中的蛋白質(zhì)可用含有少量辛醇的氯仿抽提除去,核酸留在碳suan氫鈉水溶液中,加入乙醇,RNA即以鈉鹽形式沉淀出來(lái)。

DNA的提取

DNA主要存在于細(xì)胞核中,天然狀態(tài)的DNA絕大多數(shù)是以脫氧核糖核蛋白形式存在的。從人體細(xì)胞中提取DNA時(shí),一般先獲得脫氧核糖核蛋白,再將蛋白質(zhì)除去,從中分離DNA。常用的方法是以1mol/L氯化鈉溶液抽提,得到的脫氧核糖核蛋白溶液與含有少量辛酸或戊酸的氯仿一起振蕩,除去蛋白質(zhì);或者在組織細(xì)胞破碎后以低濃度0.14mol/L氯化鈉溶液(也可用0.1mol/L氯化鈉加0.05mol/L檸檬酸代替)反復(fù)洗滌除去核糖核蛋白,再以1mol/L氯化鈉抽提脫氧核糖核蛋白,提取是用氯仿-戊酸抽提法除去蛋白質(zhì)。兩種方法比較,后一種方法使核酸降解可能少一些。以稀鹽溶液提取DNA時(shí),加入適量去污劑更有助于蛋白質(zhì)與DNA的分離。

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