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配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制作過程
點擊次數(shù):584 更新時間:2023-05-24

細(xì)菌培養(yǎng)的基礎(chǔ)是配制培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方然后再加熱溶解,補(bǔ)足水分,其制作過程包括以下4個環(huán)節(jié):

①清潔玻璃器皿  一般用肥皂液煮沸30 min,或用重鉻酸鉀和濃硫酸配制的溶液浸泡數(shù)10 min,然后用清水沖洗,晾干后保存?zhèn)溆谩?br/>②配制液體培養(yǎng)基  
a.根據(jù)需要配制培養(yǎng)基數(shù)量,先在燒杯中注入少量蒸餾水;
b.按培養(yǎng)基配方稱量各種成分的原料,依次使之溶解;
c.補(bǔ)足需水量;
d.如用牛肉膏、蛋白胨配制時,需加熱熔化后溶解;
e.加熱后,補(bǔ)足水分即可。
③配制固體培養(yǎng)基  在液體培養(yǎng)基里加入一定量的瓊脂,加熱熔化即可。
④調(diào)pH  先用精密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH,如果偏酸,用滴管向培養(yǎng)基滴加1 mol/L 的NaOH溶液,邊加邊攪拌,并隨時用pH試紙測pH,直到7.4~7.6為止。反之則用1 mol/L的HCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。
⑤過濾分裝  用紗布趁熱過濾,將濾液分裝于試管中,其量約為試管體積的1/5(不要玷污管壁)。
⑥加棉塞  培養(yǎng)基分裝完畢以后,在管口上加一個棉塞。棉塞能防止雜菌污染;保證通氣良好,加棉塞時,應(yīng)使棉塞長度的2/3在試管口內(nèi)。
⑦包扎  每10支試管用線繩捆成一捆,并且在管口外面包上一層牛皮紙,然后用線繩扎好。在每捆試管外掛上標(biāo)簽,注明培養(yǎng)基名稱、配制日期和制作者姓名。

(2)滅菌  高壓蒸汽滅菌的效果是細(xì)菌培養(yǎng)的關(guān)鍵。
具體操作如下:
①打開高壓滅菌鍋,取出里面的滅菌桶,向鍋內(nèi)加水(最好用開水)水面與底架平齊為宜。
②將扎好的試管管口向上,豎放在滅菌桶內(nèi),再將滅菌桶放回滅菌鍋。
注意:滅菌桶內(nèi)的物品不能放得太擠,否則會影響滅菌效果。
③加蓋,并將排氣軟管插入滅菌桶的排氣槽內(nèi)。以兩兩對稱的方式,同時旋緊相對的兩個緊固螺栓,以防漏氣。
④排出鍋內(nèi)的冷空氣。
⑤當(dāng)鍋內(nèi)的壓力上升到規(guī)定壓力時,維持壓力20 min,切斷電源。
⑥壓力降至0以后,打開排氣閥,排氣完畢打開滅菌鍋。

(3)擱置斜面   如果要制作斜面培養(yǎng)基,將滅菌后的培養(yǎng)基冷卻到50℃,每個試管帶棉塞的一端擱在一根木棒上,使培養(yǎng)基形成斜面,斜面的長度不超過試管總長度的一半。

(4) 檢驗滅菌效果滅菌好的培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,檢驗滅菌效果。

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