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動物細(xì)胞培養(yǎng)基本要求與操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):717 更新時間:2023-05-30

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)成為當(dāng)今生命科學(xué)各領(lǐng)域的基礎(chǔ)技術(shù)和基本技能,它也是細(xì)胞工程、基因工程和生物醫(yī)學(xué)工程的重要研究手段。那我們在實(shí)際的動物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中需要注意哪些基本要求呢?

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1、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)前必須分門別類地制訂操作卡片,如清洗卡、消毒卡、細(xì)胞常用液(細(xì)胞培養(yǎng)液、BSS液、消化液)配制卡、牛血清檢測分裝卡、細(xì)胞原代和傳代操作卡等。各卡片上注明實(shí)驗(yàn)所需器材的名稱、規(guī)格、數(shù)量、操作要領(lǐng)和實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)等。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)按卡片收集、清點(diǎn)所需用品,一并放入超凈臺內(nèi),這樣可避免操作時因物品不全而往返拿取所浩成的污染。同時,根據(jù)每個實(shí)驗(yàn)的要求,準(zhǔn)備好瓶管支架器械消毒盒等。實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)數(shù)要大于實(shí)驗(yàn)使用數(shù),瓶蓋數(shù)要大于瓶數(shù)。這樣才能有條不紊地做實(shí)驗(yàn),也減少了忙亂操作所引起的污染。

2、無菌室和操作室消毒

無菌室內(nèi)每周用乳酸蒸氣(或過氧乙酸)加紫外線消毒1~2次。實(shí)驗(yàn)前,將實(shí)驗(yàn)器材放入超凈臺內(nèi),打開超凈臺紫外線燈,同時啟動超凈臺風(fēng)機(jī),40 min后消毒完畢,關(guān)閉紫外線燈。這樣,超凈臺內(nèi)空氣被凈化,超凈臺面構(gòu)成相對無菌的環(huán)境。

3、無菌操作要求

①手指不能觸及器材使用端。如觸及,器材需更換或燒灼后再使用(如瓶口)。

②減少手與器材的接觸面,學(xué)會手指操作。

③一切操作,如打開或封閉瓶口,安裝吸管、注射器等,都要在火焰前方進(jìn)行。瓶口、吸管、注射器使用前要經(jīng)過火焰消毒后使用。

④瓶口順風(fēng)斜放在支架上。試劑用后立即封閉瓶口。瓶口長時間敞開會增加落菌的機(jī)會。

⑤不同的細(xì)胞同時操作時,要專管專用,并要勤換吸管,防止擴(kuò)大污染和交叉污染。

⑥瓶口液滴不能倒回瓶內(nèi)。液滴用干酒精棉球擦拭,瓶口再經(jīng)火焰消毒。

⑦操作者動作要準(zhǔn)確敏捷,盡量避免空氣流動。

4、實(shí)驗(yàn)中操作要求

洗手、著裝與外科臨床要求相同。雙手用肥皂洗凈后浸泡于消毒液中,并用75%的酒精擦拭。細(xì)胞培養(yǎng)用液從冰箱取出,試劑瓶口和外壁經(jīng)灑精外布擦洗后人超凈臺,超凈臺面要用酒精紗布擦拭。超凈臺上的物品面布局合理,污染廢液缸、酒精棉球缸在右側(cè)位,酒精燈在中央位,試劑瓶在左側(cè)位。拆除大包裝,點(diǎn)燃灑精燈(95%灑精)、火焰無色或微黃色表示酒精雜質(zhì)少,酒精燃燒wan全(不能使用廢酒精或工業(yè)酒精,這類酒精燃燒時產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)易附著到吸管或其他瓶、皿上,帶入培養(yǎng)液中會傷害細(xì)胞)。

浸泡75%酒精中的金屬器械用臺面消毒鑷子取出,經(jīng)無菌干紗布擦拭后,迅速通過火焰(器械不能在火焰中灼燒過長時間),冷卻后使用,避免燙傷細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)液、牛血清、酶液的吸管,使用后不能再用火焰消毒,因?yàn)槲苤袣埩舻呐囵B(yǎng)液被燒焦碳化,再使用時,會把有害碳化物帶入培養(yǎng)液中毒害細(xì)胞。操作中手指被污染時,可用酒精紗布或棉球擦拭。在實(shí)驗(yàn)過程中,不要面向操作臺講話或咳嗽,避免將唾沫中微生物帶入超凈臺內(nèi),污染空氣。實(shí)驗(yàn)者離開超凈臺時,立即用肘關(guān)節(jié)關(guān)閉側(cè)窗口,避免無菌室內(nèi)細(xì)菌隨空氣流入凈化操作區(qū)。

5、實(shí)驗(yàn)后要求

實(shí)驗(yàn)完畢,關(guān)閉超凈臺風(fēng)機(jī)和電源,未使用過的器材放入飯盒內(nèi),用過的玻璃器材投入清水中浸泡,包裝紙疊卷,繩成束分類歸人,最后,超凈臺面用酒精紗布或棉球擦拭,紫外線消毒。

6、注意事項(xiàng)

無菌操作離不開火和酒精,操作中避免事故發(fā)生。要用打火機(jī)點(diǎn)火?;鸩顸c(diǎn)火時,火星熄滅后投入廢缸內(nèi)(缸內(nèi)有廢酒精棉球)。酒精濺出臺面或瓶外壁時,立即擦干;一旦發(fā)生著火事故,立即關(guān)閉超凈臺風(fēng)機(jī),用飯盒、濕布撲滅火焰。

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