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成纖維細(xì)胞的兩種培養(yǎng)方法分享
點擊次數(shù):678 更新時間:2023-06-08

  分離培養(yǎng)

  成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)一開始并不涉及成骨作用,而主要是用于研究細(xì)胞的老化、各種外來因子對細(xì)胞的損傷、細(xì)胞在體外條件下的惡性轉(zhuǎn)化、以及某些先天性代謝異常、酶缺陷等。由于皮膚成纖維細(xì)胞易于獲取,又易于在體外生長,皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)已在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究中得到較廣泛的運用,其分離培養(yǎng)技術(shù)已相對成熟,對其體外生長規(guī)律也有了較全面的認(rèn)識。

  原代培養(yǎng)

  成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)可用酶消化法或組織塊法,其中組織塊法又因其操作簡便、條件易于控制而應(yīng)用更為普遍。通常,以酶消化法獲得的成纖維細(xì)胞懸液在接種后5~10min即可見細(xì)胞以偽足初期附著,與 底物形成一些接觸點;然后細(xì)胞逐漸呈放射狀伸展,胞體的中心部分亦隨之變扁平;最快者大約在接種后30min,細(xì)胞貼附底物即較為wan全,呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞的形態(tài)。采用組織塊法則大約在接種后2~3天到1周左右,在接種的皮膚組織塊周圍長出細(xì)胞。待細(xì)胞融合成片,鋪滿培養(yǎng)容器底壁大部分時即可進行傳代。一般都采用 yi蛋白酶(trypsin),將成纖維細(xì)胞從底壁消化下來后分瓶作傳代培養(yǎng)。成纖維細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下能保持良好的分裂增殖能力。細(xì)胞分裂時變?yōu)榍蛐危环至押笥制戒佋诟街锏谋砻娉蔀橛型黄鸬谋馄郊?xì)胞。體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞,其生命期限與物種等因素有關(guān)。

  例如:人胚成纖維細(xì)胞約可培養(yǎng)50代;恒河猴皮膚成纖維細(xì)胞能傳代超過40代;雞胚成纖維細(xì)胞則只有少數(shù)能培養(yǎng)30代;而小鼠成纖維細(xì)胞多數(shù)只能生長8代左右。另外,從老年個體取得的成纖維細(xì)胞的壽命要比取自年輕者短。由于在細(xì)胞傳代和進行體外培養(yǎng)時,細(xì)胞的生物學(xué)特性會逐漸發(fā)生一些不同于體內(nèi)的改變,故通常只將前⑩代視這正常細(xì)胞,可在此時將生長旺盛的成纖維細(xì)胞凍存起來,以備將來復(fù)蘇使用,這在將培養(yǎng)的細(xì)胞由動物實驗向人體實驗過渡的過程中必須給予足夠的重視。


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