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【微生物檢測】培養(yǎng)基的制備流程
點(diǎn)擊次數(shù):294 更新時(shí)間:2023-08-02

培養(yǎng)基的質(zhì)量是微生物實(shí)驗(yàn)室檢測工作的基礎(chǔ),事關(guān)檢測工作的準(zhǔn)確性、可靠性,在微生物實(shí)驗(yàn)室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量問題,都將導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果科學(xué)性、客觀性的偏離。因此,加強(qiáng)培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制,認(rèn)真地做好培養(yǎng)基的質(zhì)控工作,不斷完善和提高培養(yǎng)基的質(zhì)控水平,才能為微生物檢測實(shí)驗(yàn)室提供高質(zhì)量的培養(yǎng)基。



培養(yǎng)基的制備流程


1.培養(yǎng)基用水
培養(yǎng)基制備用水應(yīng)使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水,最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。


2.稱量
稱量時(shí)要用專用的角匙,避免交叉污染而影響檢驗(yàn)結(jié)果;干粉培養(yǎng)基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基。干粉培養(yǎng)基應(yīng)嚴(yán)格按照生產(chǎn)商提供的有關(guān)說明準(zhǔn)確配制。


3.復(fù)水
復(fù)水時(shí)不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養(yǎng)基中,影響微生物的生長;容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養(yǎng)基溢出;含有瓊脂粉的培養(yǎng)基,在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘;加熱培養(yǎng)基時(shí)一定要進(jìn)行攪拌,特別是瓊脂類培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出,對于少量的培養(yǎng)基最好使用沸水浴進(jìn)行加熱。燒糊的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)被破壞,并可產(chǎn)生有毒物質(zhì),如發(fā)現(xiàn)焦化,或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出,該培養(yǎng)基即不能使用,應(yīng)重新制備。對于瓊脂類培養(yǎng)基進(jìn)行再融化時(shí)應(yīng)使用沸水浴或流動(dòng)蒸汽進(jìn)行加熱,最多只能加熱兩次,第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應(yīng)棄去。


4.滅菌
培養(yǎng)基應(yīng)按培養(yǎng)基配方中.規(guī)定的條件及時(shí)進(jìn)行滅菌,通常是121℃.15.min,以保證滅菌效果和不損傷培養(yǎng)基的有效成份,含糖或特殊培養(yǎng)基,按照國家標(biāo)準(zhǔn)或生產(chǎn)商提供的說明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌,避免微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分,改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分,還會(huì)使瓊脂的凝膠強(qiáng)度下降,因此必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間,并且不可重復(fù)滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進(jìn)行檢定,并定期采用生物指示菌法或化學(xué)變色紙片對滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。


5.pH測定
微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性。滅菌前后PH會(huì)有所變化,所以滅菌前就要準(zhǔn)備好,可以用1mol/L.Na0H或.lmol/L.HCL調(diào)整,注意不可反復(fù)調(diào)pH,否則會(huì)影響培養(yǎng)基的滲透壓。


6.配制好的培養(yǎng)基保存
滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度,避免長時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi),造成過度滅菌,影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。所以建議平板傾注后立即使用。保存時(shí),盡可能貯存在不會(huì)改變其成分的條件下,即避光或在4.℃.~.12℃冰箱密閉保存。如果保存時(shí)間超過2d,應(yīng)將其放人密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養(yǎng)基如果保存時(shí)間超過2個(gè)星期,應(yīng)將其放在帶有螺旋蓋的試管或其他密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)。


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